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胚胎顯微操作-胚胎分割
日期：2025-05-10 18:53
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摘要：
(一)概況
胚胎分割是通過對(duì)胚胎進(jìn)行顯微操作，人工制造同卵雙生或同卵多生的技術(shù)，它是擴(kuò)大胚胎來源的一條重要途徑，其理論依據(jù)是早期胚胎的每一個(gè)卵裂球都具有獨(dú)立發(fā)育成個(gè)體的全能性。
本世紀(jì)三十年代，Pinrus等**證明兔2細(xì)胞胚的單個(gè)卵裂球在體內(nèi)可發(fā)育成體積較小的胚泡。之后，Tarkowski等人的實(shí)驗(yàn)胚胎學(xué)研究成果進(jìn)一步證明了哺乳動(dòng)物2細(xì)胞胚的每一個(gè)卵裂球都具有發(fā)育成正常胎兒的全能性。七十年代以來，隨著胚胎培養(yǎng)和移植技術(shù)的發(fā)展和完善，哺乳動(dòng)物胚胎分割取得了突破性進(jìn)展。Mullen等于1970年二分2細(xì)胞期鼠胚，通過體外培養(yǎng)及移植等程序，獲得了小鼠同卵雙生后代。Willadsen于1979年通過分離早期胚胎的卵裂球，成功地獲得了綿羊的同卵雙生后代。國內(nèi)張涌等通過分割小鼠、山羊早期胚胎，均獲得了同卵雙生后代。進(jìn)一步研究表明，四分胚，八分胚也可以發(fā)育成新個(gè)體。竇忠英等將7日齡的牛胚胎一分為四，實(shí)現(xiàn)了同卵三生。值得說明的是，隨著胚胎分割次數(shù)的增多，分割胚的發(fā)育能力明顯降低，這可能與胞質(zhì)的不斷減少有關(guān)。
胚胎分割是通過對(duì)胚胎進(jìn)行顯微操作，人工制造同卵雙生或同卵多生的技術(shù)，它是擴(kuò)大胚胎來源的一條重要途徑，其理論依據(jù)是早期胚胎的每一個(gè)卵裂球都具有獨(dú)立發(fā)育成個(gè)體的全能性。
本世紀(jì)三十年代，Pinrus等**證明兔2細(xì)胞胚的單個(gè)卵裂球在體內(nèi)可發(fā)育成體積較小的胚泡。之后，Tarkowski等人的實(shí)驗(yàn)胚胎學(xué)研究成果進(jìn)一步證明了哺乳動(dòng)物2細(xì)胞胚的每一個(gè)卵裂球都具有發(fā)育成正常胎兒的全能性。七十年代以來，隨著胚胎培養(yǎng)和移植技術(shù)的發(fā)展和完善，哺乳動(dòng)物胚胎分割取得了突破性進(jìn)展。Mullen等于1970年二分2細(xì)胞期鼠胚，通過體外培養(yǎng)及移植等程序，獲得了小鼠同卵雙生后代。Willadsen于1979年通過分離早期胚胎的卵裂球，成功地獲得了綿羊的同卵雙生后代。國內(nèi)張涌等通過分割小鼠、山羊早期胚胎，均獲得了同卵雙生后代。進(jìn)一步研究表明，四分胚，八分胚也可以發(fā)育成新個(gè)體。竇忠英等將7日齡的牛胚胎一分為四，實(shí)現(xiàn)了同卵三生。值得說明的是，隨著胚胎分割次數(shù)的增多，分割胚的發(fā)育能力明顯降低，這可能與胞質(zhì)的不斷減少有關(guān)。
(二)分割方法
胚胎分割方法主要有顯微操作儀分割和徒手分割兩種。
1.顯微操作儀分割
在操作儀操縱下，左側(cè)用固定吸管固定胚胎，右側(cè)將切割刀(針)的切割部位放在胚胎的正上方，并垂直施加壓力，當(dāng)觸到平皿底時(shí)，稍加來回抽動(dòng)，即可將胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)從中央等分切開，也可只在透明帶上作一個(gè)切口，切割并吸出半個(gè)胚胎。此法成功率高，但需要昂貴的儀器設(shè)備。
2．徒手分割
先用0.1～0.2％鏈霉蛋白酶軟化透明帶，在實(shí)體顯微境下，用自制切割針直接等分切割胚胎，為防止切割時(shí)胚胎滾動(dòng)，可將胚胎置于微滴中進(jìn)行切割，分開后及時(shí)加入液體。本法簡單易行，但需要有靈巧而熟練的操作技能。
無論那種方法，分割好的半胚應(yīng)完全分離，可分別裝入空透明帶內(nèi)，也可不裝入透明帶直接移植。分割桑椹胚無方向性，而囊胚則必須沿著等分內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的方向分割胚胎。
目前，胚胎分割與胚胎冷凍這兩項(xiàng)技術(shù)已緊密結(jié)合在一起、分割成的半胚在冷凍解凍后經(jīng)移植，仍可發(fā)育成新個(gè)體，并可用來生產(chǎn)異齡同卵雙生后代，在育種方面發(fā)揮作用。毫無疑問，胚胎分割和胚胎冷凍技術(shù)可為實(shí)施胚胎移植提供大量的胚胎，從而促進(jìn)了胚胎移植技術(shù)的推廣應(yīng)用。
